从下一代测序（NGS）文库构建到最佳的有丝分裂细胞分选，BioTechniques为为你呈现了许多新方法，提高你这一年的研究。在这里，我们列出2014上半年最受欢迎的十篇同行评议文章。

1、 下一代测序的文库构建：概述和挑战

Library construction for next-generation sequencing: Overviews and challenges 在2014年第一个实用指南中，Head等人回顾了测序文库的关键作用，并评估了测序文库构建过程中可能出现的挑战。当然，他们还推荐了排除和解决这些问题的方法。

2、 TUIT，一种基于BLAST的核苷酸序列系统分类工具

TUIT, a BLAST-based tool for taxonomic classification of nucleotide sequences 微生物组是目前的一个热门话题，系统分类学是这些研究中的一个重要步骤。Tuzhikov等人提出了用于微生物分类分析的一种开放资源命令行工具，甚至可将结果返回至125bp短的序列。

3、 利用免疫PCR的敏感配体蛋白质定量：一个关于单探针和邻位连接技术的关键回顾

Sensitive ligand-based protein quantification using immuno-PCR: A critical review of single-probe and proximity ligation assays qPCR已经彻底改革了基因表达分析，但是许多研究人员也想解决他们研究中的蛋白质翻译模式。在本实用指南中，Hansen等人回顾了一种满足这种需要的方法：PCR耦合的蛋白质定量，通常定义为免疫PCR（iPCR），可靶定可溶性蛋白。

4、 为改进低模板DNA结果，在PCR之前进行靶序列线性扩增

Linear amplification of target prior to PCR for improved low template DNA results 法医DNA的研究往往受到少量低质量DNA的限制。在这里，Grisedale等人提出一种扩增方法，在短串联重复（STR）分析之前扩增目标DNA，而不会引入扩增偏差。

5、 Chromatin in situ proximity（ChrISP）：高分辨率的、染色质接近程度的单细胞分析

Chromatin in situ proximity (ChrISP): Single-cell analysis of chromatin proximities at a high resolution

为了克服分辨率差或大量细胞的需要，Chen等人结合原位接近结扎技术和常规DNA FISH/免疫染色，研制了一种研究染色质内不同区域接近度的新方法。

6、 灭活哺乳动物细胞中的一个整合抗生素抗性基因，以重启抗生素选择

Inactivation of an integrated antibiotic resistance gene in mammalian cells to re-enable antibiotic selection 2014年带来了CRISPR/Cas9系统的一些新用途。在这里，Ni等人利用核酸内切酶破坏哺乳动物细胞中的抗生素抗性基因，使研究人员能够用相同的抗生素，有选择地执行更多轮次的遗传操作。

7、 酵母中菌落形态的定量分析

Quantitative analysis of colony morphology in yeast 生物膜和微生物菌落的结构，可能影响一个生物体的表型。在这里，Ruusuvuori等人提出一种新的自动化平台来分析酵母菌落形态，提供了一种可替代菌落主观评分的选择，有利于高通量的实验。

8、修饰的适配体对的系统选择用于诊断的夹心试验

Systematic selection of modified aptamer pairs for diagnostic sandwich assays

许多技术需要特异性分析试剂来进行检测和捕获。在这里，Ochsner等人提出一种分离适配体的新方法，以及确定最佳配对用于实验用途的一种筛选方法。

9、 利用QIAshredder代替酶切为微滴式数字PCR制备DNA的优点

Advantages of using the QIAshredder instead of restriction digestion to prepare DNA for droplet digital PCR 基因组DNA可能很难划分成数字PCR的微滴。为了克服这一问题，研究人员使用限制性内切酶，将DNA切割成更易于管理的片段。但是，Yukl等人表明，使用一种QIAshredder旋转柱会更快和更容易。不仅如此，它还会产生更均匀的片段，并避免使用可抑制PCR的消化缓冲液。

10. 通过荧光激活的细胞分选，比较性地分析有丝分裂特异性抗体，用于有丝分裂细胞群的大量纯化

Comparative analysis of mitosis-specific antibodies for bulk purification of mitotic populations by fluorescence-activated cell sorting 有丝分裂过程中的染色质变化，已经引起了许多生物学家的关注，但是为了研究这些细胞，我们必须首先搜集很多细胞。Campbell等人提出一种优化的FACS方法，几乎能以100%的有丝分裂纯度，分离固定的有丝分裂细胞。